飼料中黃霉素的測定高效液相色譜法

　　1簡介

　　飼料中黃霉素檢驗(yàn)的高效液相色譜法測定方法。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中黃霉素的測定，使用儀器501高效液相色譜儀。

　　2規(guī)范性引用文件

　　下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

　　GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

　　GB/T14699.1飼料采樣

　　3試樣制備

　　按GB/T14699.1抽取有代表性的飼料樣品，用四分法縮減取約200g，粉碎至過0.45mm孔徑

　　的分析篩，混勻，裝入磨口瓶中備用。

　　4原理

　　飼料中黃霉素經(jīng)50%的甲醇提取后，用pH6.0磷酸鹽緩沖液稀釋至所需濃度，反相色譜柱進(jìn)行分離，UV501紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量。

　　5試劑和溶液

　　5.1除非另有說明，本法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682二級水的規(guī)定。

　　5.2黃霉素對照品：純度100%。

　　5.3黃霉素儲備液：精密稱取黃霉素對照品適量，用甲醇配制成1mg/mL，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備溶(貯存4℃冰箱保存10天)。

　　5.4黃霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液：量取適量黃霉素儲備液，用pH6.0磷酸鹽緩沖液稀釋成濃度為0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.50μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液(4℃保存7天)。

　　5.5甲醇：色譜純。

　　5.6乙腈：色譜純。

　　5.7甲酸銨。

　　5.8磷酸。

　　5.9pH6.0磷酸鹽緩沖液：稱取磷酸氫二鉀2g與磷酸二氫鉀8g，加水使溶解成1000mL，即得。

　　6儀器設(shè)備

　　6.1501高效液相色譜儀(配紫外檢測器)。

　　6.2飼料粉碎機(jī)。

　　6.3分析天平，感量0.0001g，0.001g。

　　7測定步驟

　　7.1試樣提取

　　稱取粉碎后的飼料樣品5g(精確至0.001g)，加入50.0mL50%甲醇溶液提取后，過濾，濾

　　液用磷酸鹽緩沖液pH6.0稀釋至所需的適當(dāng)濃度，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后供高效液相色譜儀分析。

　　7.2色譜條件

　　色譜柱：(4.6×150mm，5μm)或性能相當(dāng)?shù)纳�譜柱。

　　流速：0.7mL/min。

　　檢測波長：258nm。

　　進(jìn)樣量：20μL。

　　流動(dòng)相：乙腈:0.2%甲酸銨水溶液=45:55(用10%磷酸調(diào)節(jié)至pH4.9)

　　7.3上機(jī)測定

　　取標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品試液分別注入液相色譜儀，記錄譜圖，按外標(biāo)法以峰面積進(jìn)行計(jì)算。

　　8結(jié)果計(jì)算

　　按照下式計(jì)算試樣中藥物的含量：

　　X=A×Cs×V×1000/As×m×1000×n

　　式中：

　　X——試樣中藥物的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);

　　A——應(yīng)的色譜峰面積響應(yīng)值;

　　As——標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的色譜峰面積響應(yīng)值;

　　V——定容體積，單位為毫升(mL);

　　Cs——標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);

　　m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);

　　n——稀釋倍數(shù)。

　　平行測定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。

　　9檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度

　　9.1靈敏度

　　本方法的檢測限為0.5mg/kg。

　　9.2準(zhǔn)確度

　　本方法添加濃度1.0mg/kg，回收率為80%～120%。9.3

　　精密度

　　本方法的批內(nèi)變異系數(shù)CV≤10%，批間變異系數(shù)CV≤15%。