免疫沉淀的改進方法

　　免疫沉淀是研究蛋白質(zhì)常用的技術(shù)，是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法�？贵w與細胞裂解液或表達上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶聯(lián)的agaose或Sepharose珠子孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。

　　如果蛋白樣品在孵育抗體前未經(jīng)珠子預(yù)處理，會導(dǎo)致一些非特異蛋白與ProteinA/G結(jié)合，從而干擾試驗結(jié)果。另外如果同時加入抗體和珠子，有時會出現(xiàn)沉淀效率不高的情況。

　　方法改進：

　　1、預(yù)處理：在加入抗體和珠子之前，加入20-30微升50%濃度的珠子懸浮液于蛋白裂解液中，4度搖床孵育一個小時。對于經(jīng)常做IP或者CO-IP的實驗室，可以將同一種樣品第一次預(yù)處理所用的珠子收集起來置于四度保存，以備下次沉淀同樣蛋白裂解液時預(yù)處理用。

　　2、抗體，珠子分別孵育。先將適量抗體加入蛋白裂解液中，4度搖床孵育過夜。然后加入適量珠子，4度搖床孵育2到3個小時。