常用鏡檢法的調(diào)置

　　隨著近代光學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及微電子、計(jì)算機(jī)技術(shù)的融合，賦予光學(xué)顯微鏡以新的生命力。在掌握必要的顯微鏡及其各種鏡檢法的理論知識(shí)基礎(chǔ)上，精確進(jìn)行調(diào)試、校準(zhǔn)和定期維護(hù)，對(duì)于保證顯微鏡技術(shù)的有效利用和觀測(cè)質(zhì)量尤為重要。對(duì)于鏡檢法操作過(guò)程中常易疏漏的調(diào)制環(huán)節(jié)我們來(lái)作為重點(diǎn)討論一下。

　　1 明場(chǎng)(bright field, BF)

　　定期進(jìn)行聚光鏡中心調(diào)整，實(shí)時(shí)進(jìn)行聚光鏡與物鏡NA的對(duì)應(yīng)數(shù)值調(diào)設(shè)。清潔蓋玻片、載玻片，確保沒(méi)有手印、沾染物。使用油鏡時(shí)，調(diào)焦或移動(dòng)視野要慢些以維持浸油形成的表面張力保證對(duì)焦和孔鏡角穩(wěn)定，兼做熒光觀察的物鏡最好統(tǒng)一用無(wú)熒光油。

　　2 暗場(chǎng)(dark field, DF)

　　暗場(chǎng)鏡檢首先是利用暗場(chǎng)聚光鏡的環(huán)狀裂隙和凹面鏡制造有序的斜射光，因此必須調(diào)整好光軸對(duì)中。要清潔物鏡的前透鏡等光學(xué)器件和標(biāo)本片，載玻片不能太厚，否則聚光鏡的焦點(diǎn)落到被檢物體焦面以外。

　　3 相差(phase contrast, PH)

　　鏡檢前，要用調(diào)中鏡(centering telescope，CT)逐一檢查物鏡的相板與所對(duì)應(yīng)的聚光鏡相差環(huán)是否達(dá)到光學(xué)共軛，即聚光鏡相差環(huán)環(huán)狀光闌像的透明圈與物鏡相板共軛面完全吻合，才能達(dá)到理想的相差效果。一般情況下，聚光鏡的孔徑光闌應(yīng)適當(dāng)開(kāi)大或設(shè)置在標(biāo)定PH位。切片控制在5～10μm厚度，封片劑要均勻。

　　4 DIC相差(differential interference contrast, DIC)

　　標(biāo)本或器皿要潔凈無(wú)塵，必須事先調(diào)整好起偏鏡、檢偏鏡和DIC棱鏡的設(shè)置，用CT鏡檢測(cè)出現(xiàn)清晰的干涉條紋。但兼做熒光觀察時(shí)，要把DIC器件移出光路，以避免較強(qiáng)的激發(fā)光損傷DIC器件的光學(xué)鍍膜。塑料器皿最好選擇Hoffman調(diào)制相差(Hoffman modulationcontrast，HMC)。

　　5 熒光(fluorescence，F(xiàn)L)

　　需遵循說(shuō)明書熟練掌握熒光光源的燈絲對(duì)中方法，當(dāng)熒光照明不均或亮度不佳時(shí)進(jìn)行檢查調(diào)整，特別是在移動(dòng)了熒光顯微鏡位置、過(guò)度振動(dòng)、誤觸碰了聚光和對(duì)中調(diào)節(jié)螺桿等情形后。在研究室熒光裝置最好在視場(chǎng)光闌的基礎(chǔ)上加配置孔徑光闌調(diào)節(jié)，并定期檢查熒光激發(fā)光路中心，根據(jù)標(biāo)本情況調(diào)節(jié)孔徑光闌和光路聚焦。汞燈在開(kāi)啟約5分鐘后達(dá)到最佳弧光照明亮度，一旦關(guān)閉必須等15～20分鐘后方可再次開(kāi)啟(待汞蒸汽復(fù)至常態(tài))。