幾種常用溶液的配制方法

　　1、PBS:

　　取PBS溶于1000ml的蒸餾水中，混勻，測pH值應在7.2~7.4之間，若偏離此范圍，請用0.1N的HCL或NaOH調(diào)整。

　　2、TBS：

　　2.1 Tris緩沖液配方：(0.5 M pH7.6)

　　Tris(三羥甲基氨基甲烷) 60.57g

　　1N HCL 約420ml

　　雙蒸水加至1000ml

　　Tris緩沖液配制方法：

　　先以少量雙蒸水(300~500ml)溶解Tris，加入HCl后，用HCl(1N)或NaOH(1N)將pH調(diào)至7.6，最后雙蒸水加至1000ml。此液為儲備液，4℃冰箱中保存。

　　2.2 TBS配方：

　　Tris-HCI緩沖液(0.5M pH7.6) 100ml

　　NaCI 8.5~9g (0.15mol/L)

　　雙蒸水加至1000ml

　　TBS配制方法：

　　先以少量雙蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl緩沖液，最后加雙蒸水至1000ml，充分搖勻。

　　3、枸櫞酸鹽緩沖液(Citrate buffer)：

　　3.1 儲存液：

　　A. 0.1M枸櫞酸溶液：稱取21.01g枸櫞酸(C6H8O7·H20)溶于1000ml蒸餾水中。

　　B. 0.1M枸櫞酸鈉溶液：稱取29.41g枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H20)溶于1000ml蒸餾水中。

　　3.2 工作液：

　　取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸餾水中，溶液pH值應為6.0±0.1

　　4、胰酶(Trypsin)：

　　4.1 胰蛋白酶消化液：

　　常用濃度為0.125%，即使用前將一滴試劑1胰酶溶液和三滴試劑2胰酶稀釋液均勻混合(1:3稀釋)，則可直接滴加使用。胰酶的最終濃度可以根據(jù)使用者的要求進行調(diào)整，濃度范圍可以從0.05%(1:10稀釋)至0.25%(1:1稀釋)。

　　4.2 胰蛋白酶：

　　取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的無水氯化鈣水溶液中，溶解即可。

　　5、胃酶(Pepsin)：

　　4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。

　　6、DAB：

　　6.1 DAB Kit：

　　使用前只需將試劑盒提供的A、B、C三種試劑各一滴加至1ml雙蒸水中，即可獲得1ml DAB工作液，簡單易用。

　　6.1 DAB：

　　6mgDAB溶于10mlTBS(0.05M pH7.6)，再加入0.1ml濃度為3%的H2O2，過濾掉沉淀物，即可。

　　7、AEC：

　　4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml濃度為0.1M的醋酸緩沖液(pH5.2)，然后加入0.15ml 3%H2O2，過濾掉沉淀物。

　　8、RIPA：

　　1×PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS(此液體可長期保存)。以下抑制劑以儲存液方式保存，臨用前加入RIPA中。

　　8.1 10mg/ml PMSF異丙醇溶液(用量為10ml/ml)

　　8.2 Aprotinin(Sigma產(chǎn)品，用量為30ml/ml)

　　8.3 1000mM sodium orthovanadate冷凍液

　　(用量為10ml/ml)

　　9、Blotto A：

　　常規(guī)使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。

　　10、Blotto B：

　　與Phosphotyrosine抗體共用，1×PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分實驗中milk可完全去除，但可能引起背景增高。