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簡單操作這五個(gè)步驟巧去牛血清脂肪酸

[2015/3/12]

   一、溶解:取適量的牛血潔白蛋白提取物,溶解于10倍的蒸餾水中,溶解溫度在23~27℃。用濃度為0.2NHCl,調(diào)治PH3~3.5

    二、分析:充實(shí)溶解后的溶液牛血潔白蛋白移至冰水殽雜物中舉行冰水浴,同時(shí)連續(xù)攪拌,維持30min

① PH3~3.5  ② 活性炭用量為5~6%

三、吸附:參加5%的活性炭,混勻,混懸液將混懸液移至冰水殽雜物中舉行冰水浴,同時(shí)連續(xù)攪拌,維持1小時(shí)。過濾,濾渣采取后再利用。冰水殽雜物的溫度為0~4

    四、濃縮:濾液用0.2NNaOH調(diào)治PH值至7.0,然后用20000分子量以下的超濾器舉行超濾濃縮。

五、凍干:將濃縮液按凍干曲線凍干,即將超濾后的濃縮液敏捷冷凍至-40℃,連續(xù)1小時(shí)左右,升到-25℃,連續(xù)1020小時(shí),再遲鈍升溫至0℃,維持1~4小時(shí),升溫至生存溫度20℃,分裝為成品。

牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中的分析

1.細(xì)胞生長速度遲鈍,長滿單層時(shí)間長;從同一細(xì)胞瓶中分出兩瓶細(xì)胞,用同一種作育液,分別參加10%的比較血清和待檢血清,在雷同條件下作育72小時(shí),會(huì)出現(xiàn)比較血清長滿單層,而待檢血清約莫只有60~70%,這種血清就不得當(dāng)用來大范圍作育細(xì)胞。

2.細(xì)胞傳代后形態(tài)不正常,細(xì)胞狀態(tài)產(chǎn)生變革;由于血清的質(zhì)量問題,使本來狀態(tài)正常的細(xì)胞經(jīng)傳代后形態(tài)會(huì)變差;好比:細(xì)胞瓶里會(huì)出現(xiàn)一些蠕動(dòng)的小黑點(diǎn)(并非污染),大概細(xì)胞外貌形成一層油狀包圍物;細(xì)胞的表面變得暗昧,細(xì)胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒添補(bǔ),從而影響細(xì)胞向四周擴(kuò)展生長。


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