新一代細(xì)菌內(nèi)毒素檢測技術(shù)----定量法鱟試驗(yàn)應(yīng)用介紹

細(xì)菌內(nèi)毒素（既熱原）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分，少量的內(nèi)毒素靜脈注射就可以引起發(fā)燒即“熱原反應(yīng)”，大劑量注射則可引起血液循環(huán)障礙和內(nèi)毒素休克，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致死亡。因此，生物制品類、注射用藥劑、化學(xué)藥品類、放射性藥物、抗生素類、疫苗類、透析液等制劑以及植入性醫(yī)療器材必須經(jīng)過細(xì)菌內(nèi)毒素檢測試驗(yàn)合格后才能使用。

 

鱟試驗(yàn) 法是國際上至今為止檢測內(nèi)毒素最好的方法，它簡單﹑快速﹑靈敏﹑準(zhǔn)確，因而被歐美藥典及我國藥典定為法定內(nèi)毒素檢查法。該法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)和操作簡便快捷等特點(diǎn)，逐步取代家兔熱原試驗(yàn)，成為注射用藥、靜脈用藥、醫(yī)療器械、食品、水源細(xì)菌內(nèi)毒素檢測的最佳方法。

 

鱟試驗(yàn)法所用的試劑為從海洋動(dòng)物鱟的變形細(xì)胞溶解物提取的鱟試劑。目前國內(nèi)市場上的鱟試劑大多為凝膠法鱟試劑。凝膠法鱟試劑是根據(jù)鱟血變形細(xì)胞裂解物和細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)，形成凝膠來目測判斷是否有細(xì)菌內(nèi)毒素存在，此方法無法準(zhǔn)確定量。只能得出大于或等于內(nèi)毒素限值或者小于內(nèi)毒素限值的定性結(jié)果。

 

近年來鱟試驗(yàn)法的應(yīng)用范圍不斷開拓，多種原因?qū)е铝四�膠法鱟試劑已經(jīng)不能滿足鱟試驗(yàn)法發(fā)展的需求：

 

一、制藥工業(yè)生產(chǎn)工藝流程的細(xì)菌內(nèi)毒素水平動(dòng)態(tài)監(jiān)控必須要采用定量法鱟試劑。目前凝膠法鱟試劑大多用于制藥工業(yè)成品出廠前的內(nèi)毒素限量試驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素含量等于或者大于內(nèi)毒素限值，該批產(chǎn)品不合格，必須銷毀。不合格品的出現(xiàn)將會(huì)對制藥企業(yè)產(chǎn)生重大經(jīng)濟(jì)損失。而采用定量法鱟試劑對生產(chǎn)工藝流程進(jìn)行內(nèi)毒素水平的動(dòng)態(tài)監(jiān)控，在內(nèi)毒素水平升高，但還未達(dá)到或超過內(nèi)毒素限值時(shí)及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，可以避免企業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失。

 

制藥行業(yè)實(shí)行新版GMP的要求：
（1）藥品生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制為質(zhì)量控制中的事前控制。
（2）對生產(chǎn)過程進(jìn)行動(dòng)態(tài)控制。
（3）要求取樣方便、微量、操作簡單、快速、檢查準(zhǔn)確可靠并能自動(dòng)處理數(shù)據(jù)。

定量法鱟試劑靈敏度高，操作自動(dòng)化，可以準(zhǔn)確定量，最適于監(jiān)控內(nèi)毒素含量的變化趨勢，可以有效控制各環(huán)節(jié)操作，及時(shí)反饋信息給相關(guān)操作部門，能更直觀和更好地控制內(nèi)毒素，可以大大減少不必要的損失。

 

二、在臨床醫(yī)學(xué)上，病人體液中的細(xì)菌內(nèi)毒素水平定量檢測具有重大意義。病人體液的細(xì)菌內(nèi)毒素含量直接體現(xiàn)了革蘭氏陰性菌感染的程度。體液內(nèi)毒素水平檢測可以用于快速診斷革蘭氏陰性菌感染引起的膿毒癥及內(nèi)毒素血癥。由革蘭氏陰性菌所引起的內(nèi)毒素血癥及膿毒血癥目前仍是臨床上的主要死亡原因之一。作為臨床早期診斷革蘭氏陰性菌感染的細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)需要幾天時(shí)間，不僅耗時(shí)長，而且培養(yǎng)陽性率很低。廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司內(nèi)毒素檢測鱟試劑盒（動(dòng)態(tài)濁度法）采用獨(dú)特配方樣本處理液，有效排除了血漿中各種干擾因素對鱟試驗(yàn)的干擾，在2小時(shí)之內(nèi)準(zhǔn)確檢測血漿細(xì)菌內(nèi)毒素含量，是革蘭氏陰性菌感染早期診斷的最佳方法之一。

 

三、根據(jù)鱟試劑中的G因子旁路反應(yīng)而設(shè)計(jì)的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖定量檢測鱟試驗(yàn)是早期快速診斷深部真菌感染的好方法。近年來隨著廣譜抗生素、激素和免疫抑制劑以及各種導(dǎo)管插管等治療手段的廣泛應(yīng)用，深部真菌感染的發(fā)病率日漸增高。免疫功能低下患者，如 HIV感染者，糖尿病患者，外科大手術(shù)術(shù)后患者等，也易發(fā)生深部真菌感染。目前，深部真菌感染已成為免疫功能低下患者發(fā)病和死亡最常見的原因。診斷真菌病需要進(jìn)行真菌培養(yǎng)，耗時(shí)長,培養(yǎng)陽性率很低。廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司生產(chǎn)出真菌葡聚糖檢測試劑盒（動(dòng)態(tài)濁度法）可以在2小時(shí)內(nèi)定量檢測人血漿中的（1,3）-β-D-葡聚糖。為早期快速診斷深部真菌感染診斷提供準(zhǔn)確依據(jù)。

 

定量法鱟試驗(yàn)在藥典上稱為光度測定法。分為濁度法和顯色基質(zhì)法。濁度法鱟試劑是利用光學(xué)檢測系統(tǒng)讀取在形成凝膠的過程中反應(yīng)液渾濁度升高的快慢和內(nèi)毒素濃度成反比例的關(guān)系由軟件轉(zhuǎn)換成內(nèi)毒素的濃度。而顯色基質(zhì)法是在反應(yīng)液中添加人工合成的顯色基質(zhì)，根據(jù)反應(yīng)液中內(nèi)毒素濃度和在孵育終止時(shí)釋放出的顯色基團(tuán)的量之間成正比，定量檢測樣品中的內(nèi)毒素濃度。

 

無論是動(dòng)態(tài)濁度法和顯色法鱟試驗(yàn)均需要帶良好溫育系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)光度測定儀器及配套專業(yè)的內(nèi)毒素和真菌葡聚糖檢測軟件。lonza品牌的內(nèi)毒素是美國原裝進(jìn)口鱟試驗(yàn)微生物檢測系統(tǒng)是專門為細(xì)菌內(nèi)毒素及真菌葡聚糖定量檢測鱟試驗(yàn)設(shè)計(jì)的微生物檢測系統(tǒng)。 配套lonza品牌下WinKQCL內(nèi)毒素檢測與分析軟件、LONZA內(nèi)毒素檢測儀和其他輔助儀器及除熱原耗材，適用于所有的定量法鱟實(shí)驗(yàn)，是內(nèi)毒素檢測首選推薦機(jī)型。